如何進(jìn)行細(xì)胞周期的測(cè)定

一、原理

    細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間.從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期.細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度.單個(gè)細(xì)胞的周期測(cè)定可采用縮時(shí)攝影的方法,但它不能代表細(xì)胞群體的周期,故現(xiàn)多采用其他方法測(cè)群體周期.測(cè)定細(xì)胞周期的方法很多,有同位素標(biāo)記法,細(xì)胞計(jì)數(shù)法等,這里介紹一種利用BrdU滲入測(cè)定細(xì)胞周期的方法.BrdU（5-溴脫氧尿嘧啶核苷）加入培養(yǎng)基后,可做為細(xì)胞DNA復(fù)制的原料,經(jīng)過兩個(gè)細(xì)胞周期后,細(xì)胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2,反映在染色體上應(yīng)表現(xiàn)為一條單體淺染.如經(jīng)歷了三個(gè)周期,則染色體中約一半為兩條單體均淺染,另一半為一深一淺.細(xì)胞如果僅經(jīng)歷了一個(gè)周期,則兩條單體均深染.計(jì)分裂相中各期比例,就可算出細(xì)胞周期的值。

二、儀器、用品與試劑

1、儀器、用品:同常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)

2、試劑:BrdU（1.0mg/ml）,甲醇,冰醋酸,Giemsa染液,秋水仙素,2×SSC液

三、操作步驟

1、細(xì)胞生長至指數(shù)期時(shí),向培養(yǎng)液中加入BrdU,使zui終濃度為10μg/ml.

2、44小時(shí)加秋水仙素,使每ml中含0.1μg.

3、48小時(shí)后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中,注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中.

4、常規(guī)染色體制片（見第三部分:染色體技術(shù)）.

5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC液,距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘.

6、棄去2×SSC液,流水沖洗.

7、Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干.

8、鏡檢100個(gè)分裂相,計(jì)*,二,三,四細(xì)胞期分裂指數(shù).

9、計(jì)算:細(xì)胞周期（Tc）=48/（小時(shí)）


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